15%一步法SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒

产品简介

本试剂盒适用于Tris-甘氨酸电泳体系，其中包括SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需制胶器具，不需要液封分离胶，不需要额外加入TEMED，即可制备SDS-PAGE凝胶。所配置的浓缩胶带有颜色，便于上样，本试剂盒采用迁移型颜料，电泳时该颜料会压缩并向下迁移，迁移速度快于溴酚蓝，不会与蛋白结合，不残留在下层胶中，对电泳、考染、转膜以及蛋白的ECL或荧光检测等均无影响。本试剂盒中采用改进的促凝剂，并以固体粉末形式提供2瓶，首次使用时加入相应体积的ddH2O或双蒸水，可保证在4℃稳定保存六个月，使用方便；用完一瓶或者在4℃存放超过6个月后再开启第二瓶加入相应体积的ddH2O双蒸水；加入ddH2O如长期不用，可储存于-20℃，延长保质期。本试剂盒分离胶和浓缩胶缓冲液均含有SDS，只适用于变性凝胶电泳。

产品内容

*注：改良型促凝剂首次使用前加入5mL ddH2O(或者双蒸水)储存4℃，保质期6个月，避免-20℃储存使用前需融化，更加方便快捷，如长期不用，可储存于-20℃，延长保质期。

产品特点

Ø  一步法灌胶——不需等待分离胶凝固，直接灌注上层胶，无需液封**；

Ø  操作简单快速——5分钟可灌注多块凝胶，15min即可凝胶；

Ø  彩色上层胶——彩色上层胶，便于点样，迁移型染料，避免任何干扰；

Ø  避免异味——无需使用TEMED，避免刺激性难闻气味。

**注：凝固后上下层胶分界线平整度略弱于传统两步法配胶，但对后续电泳没有影响。为了下层胶分界线平齐也可采用两步法灌胶，灌完下层胶后，加入适量水或醇(如异丙醇、正丁醇等)封闭于下层胶之上，凝胶后弃去封闭液加入上层胶。

制胶步骤

以一块0.75/1.00/1.50mm厚的mini胶为例。

1.        参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

2.        取等体积的分离胶溶液（2×）和分离胶缓冲液（2×），各2 / 2.7 / 4mL，混匀。

3.        取等体积的浓缩胶溶液（2×）和浓缩胶缓冲液（2×），各0.75 / 1 / 1.5mL，混匀。

4.        向步骤2已混合溶液中加入40 / 54 / 80μL的改良型促凝剂（首次使用前请加入5mL ddH2O或者双蒸水），轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。将混匀后的溶液注入凝胶模具中，使液面距离短玻璃板上沿约1.5-2.5cm即可（此溶液为过量，请勿全部灌入）。

5.        向步骤3已混合溶液中加入15 / 20 / 30μL的改良型促凝剂，轻轻搅拌使其混匀，不需要等待下层胶凝固，可直接将混匀后的溶液缓慢注入分离胶溶液上面，插入梳子。注意加入分离胶后要在2分钟内将浓缩胶注入凝胶模具内，且在灌注浓缩胶时要缓慢，防止浓缩胶与分离胶混合在一起。

注意：为了下层胶分界线平齐也可采用两步法灌胶，灌完下层胶后，加入适量水或醇(如异丙醇、正丁醇等)压封下层胶，凝胶后弃去封闭液加入上层胶。

6.        静置约15分钟，等待浓缩胶凝固，小心地拔出梳子，用注射器或枪头，吸取电泳缓冲液将加样孔冲洗干净，即可进行常规电泳操作。

注意事项

1.       蛋白条带的清晰和平直与电泳条件相关，如果需要蛋白条带更加清晰、平直，建议电泳时电压在100-120V之间，如需要加快电泳速度，可增加至150V。

2.        PAGE凝胶的凝聚速度与温度和促凝剂的用量密切相关，可通过改变促进凝剂的用量，控制PAGE 凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作，应根据实际操作情况做适当的调整。

3.        本产品已加入TEMED替代品，如需进一步加速凝胶，可在配置时加入TEMED。

4.        本产品凝胶速度快，不需将凝胶模具放在37℃温箱或者空调热风口下，正常室温条件下配置即可。

5.        为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6.        本产品仅限科研使用。

附表 1. SDS-PAGE 分离胶的浓度与最佳分离范围